内毒素标准品复溶为什么混匀30分钟

内毒素标准品复溶混匀30分钟是为了确保内毒素充分活化和均匀分布。

内毒素的化学成分与结构特点使其在溶于水或稀释时，亲水性糖链朝向水，疏水性的脂质链部分背向水，LPS的疏水端会自然聚集成团，形成直径约为0.1μm的双层壳状或泡囊，其中脂质A藏于聚集团内部或贴附于器皿上，而脂质A是激活鲎试剂的主要部分，在水溶液中由于其疏水性不能与鲎试剂充分接触，会造成检测到的内毒素含量偏低。复溶时的混匀操作有助于打破这种聚集状态，使内毒素均匀分散在溶液中，保证检测结果的准确性。

内毒素标准品复溶为什么混匀30分钟

内毒素标准品复溶混匀30分钟是为了确保内毒素充分活化和均匀分布。 内毒素标准品复溶后需要在旋涡混旋器上旋混振荡一定时间

为什么稀释内毒素标准品需要旋涡振荡?_试剂

为什么对标准内毒素的稀释有如此特殊的要求呢这与内毒素的化学成分与结构有关。 内毒素溶于水或稀释时，LPS的亲水性糖链朝向水和水接触，而疏水性的脂质链部分却背向水，这样，LPS的疏水端自然聚集成团，形成直径约为0.1μm的双层壳状或泡囊。 脂质A藏于聚集团的内部或贴附于器皿上，而脂质A是激活堂试剂的主要部分，在水溶液中，由于其疏水性而不能与鲎试剂充分接触，造成检测到的内毒素含量偏低。 若是检测前利用旋涡装置充分振荡，可以使贴附于器皿上的内毒素分子脱落，使聚集团的相对分子质量下降。 经振荡后的内毒素溶液重新静置一段时间后，内毒素仍然会聚集成团或贴附于器皿壁上，所以样品存放一段时间后，在使用前仍需充分振荡。 实验表明，同一批号的国家参考标准内毒素在稀释时震荡与否结果相差很大。 若采用旋涡震荡法稀释内毒素，效价测定的结果与国际参考标准内毒素(IS)基本一致;若不经振荡稀释，则测定的效价要比国际参考标准内毒素低50%~75%。 所以，内毒素在稀释时一定要充分振荡，才能得到所标示的效价。 在实施1995年版的《中国药典》前，我国相当部分的鲎试剂在标定灵敏度时，没采用振荡稀释内毒素的方法，导致标定的灵敏度高于实际值100%~300%。

细菌内毒素工作标准品复溶时限考察-有问有答

x老师们，我想问个问题，细菌内毒素工作标准品复溶稀释之后，假如我5EU做验证放置6个小时没问题，能不能输出大于5EU的也没有问题细菌内毒素工作标准品说明书上标示为一次性使用的，稀释后不可储存1、无权下载附件会员可能原因:1.\"待验证用户组\"，请点击注册邮箱里面收到的确认邮件即可;

超详细!关于细菌内毒素检测(凝胶法)的原理及详细步骤!

1.细菌内毒素检测凝胶法原理:利用鲎血液中的变性细胞，经裂解液和机械方式促使细胞破裂而提取到的一种细胞溶解物，能与极微量的细菌内毒素形成特异凝胶反应，反应的速度和凝胶的坚固程度与内毒素浓度有关。 2.细菌内毒素凝胶法检测所需主要设备(1)电热干燥箱。 (2)旋涡混合器。 (3)超净工作台。 (4)试管恒温仪、恒温水浴箱或恒温培养箱。 (5)鲎试剂。 是从鲎的血液中提取出的冻干试剂，可以与细菌内毒素发生凝集反应。 (6)细菌内毒素工作标准品。 (7)细菌内毒素检查用水应符合《中国药典》规定的灭菌注射用水标准，其内毒素含量小于0.015EU/mL(用于凝胶法)或0.005EU/mL(用于光度测定法)，且对内毒素试验无干扰作用。 (8)实验所用器皿:需经处理，去除可能存在的外源性内毒素。 耐热器皿常用干热灭菌法(250，至少30分钟)去除，若使用塑料器具，如加样吸头等应置30%双氧水中浸泡4h，再用细菌内毒素检查用水充分冲洗后置60烘干备用。 也可以选择标明无热原的商业产品。 (9)试验常用材料器具:剪刀、砂轮、废品缸(收集碎玻璃)、无热原试管(10mm×75mm)、匹配的试管架、封口膜、酒精棉球、时钟、移液器及无热原吸头。 3.鲎试剂灵敏度复核试验当使用新批号的鲎试剂或试验条件发生了任何可能影响检验结果的改变时，应进行鲎试剂灵敏度复核试验。 目的为考察鲎试剂的灵敏度是否准确，同时也考查检验人员操作方法是否正确及试验条件是否符合规定。 4.供试品干扰试验干扰实验的目的是确定供试品在多大的稀释倍数或浓度下对内毒素和鲎试剂的反应不存在干扰作用，为能否使用细菌内毒素检查法提供依据。 并且验证当供试品的配方和工艺有变化，鲎试剂来源改变或供试品阳性对照结果呈阴性时供试品是否存在干扰作用。 由于干扰实验检验的是在供试品存在的情况下内毒素与鲎试剂的反应是否正常，与所使用鲎试剂的灵敏度无关，因此在干扰实验预实验中原则上可使用任一灵敏度的鲎试剂。 (1)对未知或可疑的供试品初次进行细菌内毒素试验之前应先进行干扰试验，目的是检验供试品对细菌内毒素试验是否有抑制或增强作用，以及其他影响细菌内毒素试验准确性和敏感性的干扰作用。 (2)当鲎试剂、供试品来源、供试品配方或生产工艺有变化或其他任何可能影响细菌内毒素试验结果的试验条件改变时，应重新进行干扰试验。 (3)每种产品应取3批，并分别使用不少于两个制造商生产的鲎试剂进行干扰试验。 5.试验准备(1)确认所需试验的试剂:鲎试剂、细菌内毒素工作标准品、细菌内毒素检查用水(2)确认所需试验的器具材料(如上)6.试验方法(1)同一批号选取至少3各单位供试品;(2)供试液的制备:供试品应使用细菌内毒素检查用水为浸提介质。 根据本单位产品标准规定的细菌内毒素限值确定浸提介质的体积。 7.凝胶法操作方法(1)细菌内毒素标准溶液的制备(按说明书进行)(2)鲎试剂灵敏度复核试验根据鲎试剂灵敏度的标示值(λ)，将细菌内毒素国家标准品或细菌内毒素工作标准品用细菌内毒素检查用水溶解，在旋涡混合器上混匀15分钟或参照标准品说明书中要求的混匀时间进行操作，然后制成2λ、λ、0.5λ和0.25λ四个浓度的内毒素标准溶液，每稀释一步均应在旋涡混合器上混匀30秒或参照标准品说明书中要求的混匀时间进行操作。 取不同浓度的内毒素标准溶液，分别与等体积(如0.1mL)的鲎试剂溶液混合，每一个内毒素浓度平行做4管;另外取2管加入等体积的细菌内毒素检查用水作为阴性对照。 将试管从恒温器中轻轻取出，缓缓倒转180，若管内形成凝胶，并且凝胶不变形、不从管壁滑脱者为阳性;未形成凝胶或形成的凝胶不坚实、变形并从管壁滑脱者为阴性。 保温和拿取试管过程应避免受到振动，造成假阴性结果。 当最大浓度2λ管均为阳性，最低浓度0.25λ管均为阴性，阴性对照管为阴性，试验方为有效。 按下式计算反应终点浓度的几何平均值，即为鲎试剂灵敏度的测定值(λc)。 λc=antilg(∑X/n)式中X为反应终点浓度的对数值(lg)。 反应终点浓度是指系列递减的内毒素浓度中最后一个呈阳性结果的浓度;n为每个浓度的平行管数。 (3)干扰试验a、应开展干扰试验预实验，确定供试品的最小不干扰稀释倍数;采用多个不同稀释倍数的供试品溶液，如某医疗器械产品限值为20EU/件，鲎试剂灵敏度为0.25EU/mL，按MVD=L/λ，【20EU/件÷0.25EU/mL=80】，则其最大有效稀释倍数为80mL/件。 只有当溶液A和阴性对照溶液D的所有平行管都为阴性，并且系列溶液C的结果符合鲎试剂灵敏度复核试验要求时，试验方为有效。 当系列溶液B的结果符合鲎试剂灵敏度复核试验要求时，认为供试品在该浓度下无干扰作用。 其他情况则认为供试品在该浓度下存在干扰作用。

细菌内毒素标准品稀释方法的分析

细菌内毒素检查法在一些制剂的热原中，正逐步取代家兔试验法.细菌内毒素标准品(工作标准品或参考标准品)稀释的准确程度，直接影响制剂热原检测的准确程度，关于细菌内毒素标准品的稀释，中国药典要求，细菌内毒素工作标准品复溶后，必须在旋涡混旋器上旋混振荡20分...你可以通过身份认证进行实名认证，认证成功后本次下载的费用将由您所在的图书馆支付您可以直接购买此文献，1~5分钟即可下载全文，部分资源由于网络原因可能需要更长时间，请您耐心等待哦~

凝胶测bet

细菌内毒素检验(二)4.3.3.2漩涡混合器作用:混旋细菌内毒素标准品，保证标准品溶液的浓度一致。 方式:对冻干粉的细菌内毒素标准品复溶后，应混旋15min。 标准品梯度稀释过程中，每步稀释应混旋30s.4.3.3.3试管恒温仪:作用:提供37恒温的环境。 方式:活性氧化铝球的制备与吸附能力详细介绍，出产活性氧化铝的质料、活性氧化铝的首要制备办法及其改性办法。 快脱粉经过迅速煅烧α-三水铝石出产;拟薄水铝石经过碳化法、碱法、酸法、中和法和醇铝法出产。 快脱粉经过滚动成型制作活性氧化铝球;拟薄水铝石经过油BET试验中常见的6种吸附等温线和5种回滞环1.什么叫吸附，吸附有哪些类型，有何区别，各有何用途广义来说，分子，原子或者离子等在物质界面附近的富集都可以叫做吸附(严格区分的话，包括吸附和吸收等)。 吸附可以分为物理吸附和化学吸附，两者最主要的区别是有没有形成化学键(严格的鉴定比16:40:47自然科学基金委公布2024年工程与材料学部重点项目优先资助领域16:35:17全球规模最大乙醇生产装置启动试生产16:34:27新型隔膜提升锂离子电池安全性16:33:01降温至94毫开!\"新式\"制冷迎来\"曙光\"16:31:11宁波材料所获首届浙江省知识产权奖发明专利一等奖16:31:11尾矿固废资源利用3×185万吨/年流态化磁化焙烧项目签约16:30:39硼中子俘获治疗项目获第八届\"创客中国\"。

内毒素工作标准品要怎么使用才对?-化工仪器网

内毒素工作标准品由精制大肠杆菌制备而成，用于细菌内毒素检查中的鲎试剂灵敏度复核、干扰试验和各种阳性对 技术文章内毒素工作标准品要怎么使用才对?科德角国际生物医学科技(北京)进入商铺内毒素工作标准品由精制大肠杆菌制备而成，用于细菌内毒素检查中的鲎试剂灵敏度复核、干扰试验和各种阳性对照，也可用于内毒素定量检查。 本产品是中国食品药品检定研究院制备，以细菌内毒素国家标准品为基准标定其效价，其标准和各国药典一致。 用于试验中堂试剂灵敏度复核、干扰试验及设置的各种阳性对照。 1、溶解:内毒素工作标准品使用时加入细菌内毒素检查用水1ml，复溶后置旋涡混合仪上混匀15min; 2、稀释:用细菌内毒素检查用水将内毒素制备成所需浓度的细菌内毒素标准溶液(如2.0入、入、0.5入、0.25入等)，每稀释一步均应旋涡混合仪上混合30s。 3、1Eulml的内毒素工作标准品内毒素溶液可按倍比稀释内毒素，制备系列浓度的内毒素溶液，稀释后的内毒素必须在4小时内使用。

细菌内毒素工作标准品

细菌内毒素工作标准品 细菌内毒素工作标准品ControlStandardEndotoxin(CSE)主要成份为大肠杆菌的内毒素精品，其效价以细菌内毒素国家标准品标定。 用于细菌内毒素试验中的鲎试剂灵敏度复核，干扰试验和各种阳性对照，并可用于定量法。 (非药品，仅限科研使用) 1.溶解:使用时加入细菌内毒素检查用水1ml，复溶后置旋涡混合仪上混匀15min。 2.稀释:用细菌内毒素检查用水将内毒素制备成所需浓度的细菌内毒素标准溶液(如2.0λ、λ、0.5λ、0.25λ等)，每稀释一步均应旋涡混合仪上混合30S。 1Eu/ml的内毒素溶液可按倍比稀释内毒素，制备系列浓度的内毒素溶液，稀释后的内毒素必须在4小时内使用。 重组试剂鲎试剂MAT热原检测试剂盒G试验试剂盒全自动内毒素检测机器人系统内毒素定量检测系统内毒素Endotoxin内毒素去除试剂盒鲎试验配套仪器无热原/无内毒素耗材细胞培养无热原耗材鲎试验辅剂防护用品细菌内毒素标准品(CSE)细菌内毒素标准品CSE特点安瓿装3.jpg$configdata.title}

细菌内毒素工作标准品检验操作规程

3.1凝胶法3.1.1根据鲎试剂灵敏度的标示值(λ)，将细菌内毒素国家标准品用检查用水溶解，在旋涡混合器上混合15分钟，然后制备成4个浓度的标准内毒素溶液，即2λ、0.5λ和0.25λ备用，每稀释一步均应在旋涡混合器上混合30.范围:本标准规定了细菌内毒素工作标准品的测定方法和操作要求;适用于本公司细菌内毒素工作标准品、细菌内毒素质控品的质检测定。

细菌内毒素工作标准品为什么要溶解15分钟

细菌内毒素工作标准品为什么要溶解15分钟硝化细菌是有益细菌，喜爱氧气，讨厌光线。 一缸水之中生态环境各个部分都有一个比例，和最佳配置问题。 在养好鱼的水中有很多种细菌，包括藻类。 而硝化细菌是主导细菌，比例在%70以上。 如果藻类繁殖茂盛不要理会，便会影响到硝化细菌的位置，从而破坏水质。 说这些是说明，就是你加入2瓶的硝化细菌，也不会有事，溶解不下的细菌会在1小时之内全部死去，饱和就是饱和。 不会腥味大，除非...。 硝化细菌是有益细菌，喜爱氧气，讨厌光线。 比如一个缸鱼能下最多几条，而细菌是一样的。 不会腥味大，除非你的硝化细菌有问题。 不会氧气跟不上，因为它们始终有个量，对鱼是没有影响的，除非你是冬天倒入冰凉的硝化细菌，那就没办法了…………。

140405 细菌内毒素标准品(10EU)使用手册v1点1

140405细菌内毒素标准品(10EU)使用手册v1点1.pdf 天净沙系列CAT#:140405-10常温运输及保存使用手册V1.1北京天恩泽基因科技有限公司北京市海淀区上地信息路26号北京市留学人员海淀创业园中关村创业大厦506网址:.tiandz;电话:*-*8;电邮:order@tiandz产品及特点本产品系参照中国药品生物制品检定所的细菌内毒素工作标准品标定的大肠杆菌内毒素冻干品，用于鲎试剂实验中的鲎试剂灵敏度复核，干扰实验和各种阳性对照。 本产品外观为白色疏松海绵状固体。 规格及成分成分编号10支包装细菌内毒素标准品，10EU/支14040510支使用手册1份运输及保存常温运输，室温阴凉处保存，有效期一年。 自备试剂细菌内毒素检查用水等使用方法内毒素标准溶液的配制1.溶解:取一支标准品，加入细菌内毒素检查用水1.0mL，复溶后置旋涡混匀器上混匀15分钟，得到溶解即为10EU/mL的内毒素标准品溶液。 如果需要其他浓度的内毒素溶液，可根据实验要求配制。 2.稀释:方法如下(以0.1，0.25，0.5，1.0EU/mL为例):取上步配制的10EU/mL的内毒素溶液，稀释为1.0EU/mL的内毒素溶液，以1.0EU/mL的内毒素溶液为母液按下表稀释成0.1，0.25，0.5，1.0EU/mL的浓度梯度。 配制好的内毒素标准溶液应在4小时内用完。 表1内毒素标准溶液配制内毒素浓度(EU/mL)10.50.250.1加细菌内毒素检查用水(mL)00.50.750.9加1EU/ml内毒素溶液(mL)10.50.250.1注意事项1.本品为一次性使用。 仅供体外鲎实验检测，禁止用于注射、口服等。 2.实验所用的器皿需经过处理，以除去可能存在的外源性内毒素，可以经250℃干烤至少60分钟处理，也可以采用其他确保不干扰细菌内毒素检测的适宜方法处理。 实验操作过程中应该防止微生物的污染。 3.稀释的内毒素溶液静置时间超过10分钟，用前需要在涡旋混匀器上剧烈混匀1分钟，放置4小时以上的内毒素溶液应丢弃。 君，已阅读到文档的结尾了呢~~

细菌内毒素工作标准品振荡15分钟的理论依据介绍

细菌内毒素(Endotoxin)，是革兰氏阴性菌的细胞壁外壁层上的特有结构，它在细菌生长、繁殖过程中，并不分泌到介质中，也不能从外壁层上自然脱落，它不是细菌的代谢产物，当细菌死亡解体后，才显示出一系列的内毒素生 当前位置细菌内毒素工作标准品振荡15分钟的理论依据介绍 细菌内毒素(Endotoxin)，是革兰氏阴性菌的细胞壁外壁层上的特有结构，它在细菌生长、繁殖过程中，并不分泌到介质中，也不能从外壁层上自然脱落，它不是细菌的代谢产物，当细菌死亡解体后，才显示出一系列的内毒素生物活性。 细菌内毒素的化学结构是脂多糖和微量蛋白的复合物，脂多糖由三部分组成:O-特异性链、核心多糖和类脂A三部分组成。 O-特异性链:向外由若干个低聚糖的重复单位组成的多糖链，具有特异性。 核心多糖:分为内核心及外核心，外核心由数种单糖，包括葡萄糖、半乳糖、乙酰氨基葡萄糖等组成。 内核心含有庚糖及特殊的KDO(3-脱氧-D-甘露糖-辛酮糖)。 KDO以耐酸的酮糖键与类脂A的氨基葡萄糖连接。 所有G-菌都有此结构。 类脂A:位于最外层，是以脂化的葡萄糖胺二糖为单位，通过焦磷酸键组成的一种独特的糖脂化合物，具有致热作用，是革兰氏阴性细菌内毒素的毒性成分。 游离的类脂A可自身凝集成高分子的复合物，其分子量大小不等。 游离的类脂A含有疏水性的中心及亲水性的边缘，是一种双相分子。 内毒素标准品是从大肠杆菌E.ColiO111B4菌株的细胞壁提取精制而成。 细菌内毒素工作标准品用细菌内毒素检查用水溶解后，内毒素的疏水性中心相互结合形成大分子复合体，而难溶于水。 《细菌内毒素检查法》要求将细菌内毒素国家标准品或细菌内毒素工作标准品用细菌内毒素检查用水溶解后在旋涡混合器上混匀15分钟，每稀释一步均应在旋涡混合器上混匀30秒钟。 在旋涡混合器上混匀15分钟的目的是借助外力破坏这种分子复合体，使内毒素均匀的分布在水溶液中，保证试验结果的真实准确。 如果没有旋涡混合器或混匀时间不够，均会导致细菌内毒素分子复合体，这种溶质不能分散在溶媒中，而影响试验结果的准确性。

为什么内毒素检测时,内毒素溶解需要振荡15min以上?

为什么内毒素检测时，内毒素溶解需要振荡15min以上?振荡15min以上是为了借助外力破坏内毒素分子复合体，使内毒素均匀分布在水溶液中，保证实验结果的准确性，混匀时间不够会导致内毒素分子复合体不均匀分散在溶液中，会影响结果的准确性振荡15min以上是为了借助外力破坏内毒素分子复合体，使内毒素均匀分布在水溶液中，保证实验结果的准确性，混匀时间不够会导致内毒素分子复合体不均匀分散在溶液中，会影响结果的准确性

细菌内毒素国家标准品活

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内毒素实验凝胶法-20221005.ppt

2、温调节中心发热新蛋白合成新mRNA翻译第4页，共43页，2022年，5月20日，10点17分，星期四1942年，美国药典首次收载热原检查法，中国药典自第一版(1953年版)起收载。 2、对药物引起的增加、抑制作用无法控制。 3、不同细菌产生的热原质的致热域有差别。 4、非定量反应。 虽然不排除有其他热原物质存在，但细菌内毒素是最主要的热原物质。 第5页，共43页，2022年，5月20日，10点17分，星期四细胞壁结构:肽聚糖脂蛋白革兰氏阳性菌革兰氏阴性菌外膜磷壁酸脂多糖细菌内毒素:革兰氏阴性细菌3、细胞壁外膜中的脂多糖(LPS)。 脂多糖结构:多糖O抗原核心多糖类脂A致热活性部分第6页，共43页，2022年，5月20日，10点17分，星期四细菌内毒素的生物活性1、致热性。 2、致死性毒性。 3、白细胞减少。 4、激活凝血系统。 5、降低血压，休克。 6、Shwartzman反应。 7、刺激淋巴细胞有丝分裂，等等。 第7页，共43页，2022年，5月20日，10点17分，星期四细菌内毒素的耐热性细菌内毒素具很强的耐热性，一般的高压灭菌不能去除细菌内毒素，需250至少30分钟以上的干热灭菌才能使其灭活。 4、第8页，共43页，2022年，5月20日，10点17分，星期四实验用器具的处理内毒素试验中使用的器皿都要经过处理去除可能存在的外源性内毒素。 耐高温的玻璃器皿等置于电热干烤箱内180干烤至少2h或者250干烤至少30分钟;塑料器皿置于30双氧水中浸泡4h，再用细菌内毒素检查用水充分冲洗，60烘干备用。 第9页，共43页，2022年，5月20日，10点17分，星期四细菌内毒素的单位内毒素的量值:1、内毒素单位(EU)1982年FDA将当时美国代号为EC2的内毒素标准品规定为5EU/ng。 2、国际单位(IU)WHO先后两次组织协作标定，建立内5、毒素国际标准品，其中第二批内毒素国际标准品适用于所有内毒素检查法，且明确1IU1EU。 第10页，共43页，2022年，5月20日，10点17分，星期四细菌内毒素检查法凝胶法浊度法光度法显色基质法重现性好能定量能控制药物的增强/抑制干扰操作简便。 节省时间方法分类方法特点第11页，共43页，2022年，5月20日，10点17分，星期四细菌内毒素检查法概念本方法是利用鲎试剂检测由革兰氏阴性菌产生的细菌内毒素，以判断供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法。 第12页，共43页，2022年，5月20日，10点17分，星期四鲎:一种古老的栖身于沿海的海洋生物，节肢动物门，在我国主要分布于浙江、福建及两广的沿海一带。 鲎试剂:利用鲎血液中的变性细胞，经裂解液和机械方式促使细胞破裂而提取到的一种细胞溶解物，能与极微量的细菌内毒素形成特异凝胶反应，反应的速度和凝胶的坚固程度与内毒素浓度有关，是体外检测内毒素的敏感试剂。 第13页，共43页，2022年，5月20日，10点17分，星期四第14页，共43页，2022年，5月20日，10点17分，星期四凝胶法概念凝胶法是通过鲎试剂与内毒素产生凝集反应的原理来检测或半定7、量内毒素的方法。 第15页，共43页，2022年，5月20日，10点17分，星期四鲎试剂与内毒素反应机理内毒素C因子活化的C因子凝胶B因子凝固酶原凝固酶活化的B因子凝固蛋白原鲎凝血系统酶联反应第16页，共43页，2022年，5月20日，10点17分，星期四二、细菌内毒素凝胶法实验程序1、试验准备:试剂、仪器及用具2、选择鲎试剂灵敏度，计算样品稀释度3、鲎试剂灵敏度复核4、供试品干扰试验(新药或新方法)5、供试品内毒素限量检查第17页，共43页，2022年，5月20日，10点17分，星期四凝胶法中用到的仪器1.超净工作台第18页，共43页，2022年，5月20日，10点17分，星期四凝胶法中8、用到的仪器2.恒温培养箱孵育样品浸提液以及培养试验结果。

细菌内毒素标准品(2-20EU/只)|10只

细菌内毒素标准品(2-20EU/只) 产品及特点本产品系参照中国食品药品检定研究院的细菌内毒素国家标准品标定的大肠杆菌O111:B4内毒素冻干品，它具有下列特点: 1.用于制作内毒素标准曲线。 2.用于鲎试剂实验中鲎试剂灵敏度复核。 3.用于鲎试剂干扰实验。 4.用作鲎试剂检测的阳性对照。 5.本产品外观为白色疏松海绵状固体。 6.只能用于科研，严禁输入人体。 规格及成分成分编号小扁盒包装 细菌内毒素标准品，2-20EU/支(注)14040510支使用手册140405sc1份 注:内毒素标准品每个批次效价不同，以产品标签上的标准为准。 运输及保存常温运输，室温阴凉避光保存，有效期三年。 自备试剂细菌内毒素检查用水等 使用方法注意:接触本试剂的所有器皿必须是无热原的。 耐热器皿(如玻璃)可以经干热灭菌(250℃干烤30分钟以上)去除热原。 无热原表示内毒素的浓度低于0.005EU/mL。 内毒素标准溶液的配制。 1.溶解:取一支标准品，加入细菌内毒素检查用水不超过1.0mL，复溶后置旋涡混匀器上混匀15分钟，得到溶解即为10EU/mL的内毒素标准品溶液。 2.稀释:上述内毒素溶液可用细菌内毒素检查用水进一步稀释成各个不同的浓度梯度，稀释时应在旋涡混合器上混匀1分钟。 每一步稀释的稀释倍数不得超过10倍。 3.稀释的内毒素静置10分钟后即可使用，用前在旋涡混匀器上混匀1分钟。 注意:内毒素溶液配制超过4小时后不得使用。 4.如果需要其他浓度的内毒素溶液，可根据实验要求配制或稀释。 塑料离心管不得用于内毒素的稀释，以避免非特异性吸附。 5.稀释:方法如下(以0.1，0.25，0.5，1.0EU/mL为例):取上步配制的10EU/mL的内毒素溶液，稀释为1.0EU/mL的内毒素溶液，以1.0EU/mL的内毒素溶液为母液按下表稀释成0.1，0.25，0.5，1.0EU/mL的浓度梯度。 配制好的内毒素标准溶液应在4小时内用完。 工商信息 企业名称

细菌内毒素灭活验证标准品

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细菌内毒素检查方法建立中应注意的几个问题.下载

，细菌内毒素检查方法建立中应注意的几个问题.细菌内毒素检查方法建立中应注意的几个问题摘要:本文对细菌内毒素检查方法的建立、限值的确定、方法学验证及常见问题进行了介绍。 在建立细菌内毒素检查法之前，应尽可能多的收集有关该药品的基本信息，例如:有关样品的溶解性信息，推荐的稀释液，在水中的溶解度，以及最适溶剂;样品的pH范围;分子量大小;产品规格、体积或重量;拟用于临床的用法和用量等等。 以便选择合适的样品处理方法和内毒素检查方法，对于早期研发阶段的药物，应选择合适的赋形剂，以有利于细菌内毒素检查中对样品的稀释处理。 此外，在确定内毒素限值时还应尽可能采用最大人拟用剂量，为临床安全性和有效性研究中增加剂量留出空间。 一、细菌内毒素检查方法建立的主要步骤对某一新化合物建立细菌内毒素检查方法时，首先应根据人体最大日给药剂量和给药途径，计算和确定样品的内毒素限值，选择合适的鲎试剂，根据临床规格，计算最大有效稀释倍数，稀释产品，并在低于最大稀释倍数的浓度下进行检查。 当测定结果有争议时，除另有规定外，以素限值越低。 一般按以下公式计算:内毒素限值L=K/M。 式中内毒素限值L是以EU/ml、EU/mg或EU/u表示;K为按规定的给药途径，人体每公斤体重每小时最大可耐受的内毒素剂量，以EU/(kg.h)表示，注射剂K=5EU/(kg.h)，其中放射性药品注射剂K=2.5EU/(kg.h)，鞘内用注射剂K=0.2EU/(kg.h)。 一般我国人群平均体重按60kg计算，人体对细菌内毒素的最大耐受量为300EU/h;另我国人体的平均体表面积按1.55m2计算，人体每平方米的最大耐受剂量为(300EU/h)/1.55m2=(193EU/h)/m2。 在细菌内毒素检查法中，细菌内毒素标准品和鲎试剂常常以EU/ml表示，所以在具体实验中样品的内毒素的限量可以转换为EU/ml的表示方法，可使实验操作计算更为方便。 假定产品A的浓度为100mg/ml(或原料药经溶解后的浓度为100mg/ml)，那么，将产品A的限值从EU/mg转变为EU/ml时，内毒素限值L=0.2EU/mg100mg/ml=20EU/ml。 内毒素限值计算举例(二):B注射剂的临床最大用药剂量为1g/m2，规格为50mg/ml，内毒素限值L=(193EU/m2)/(1g/m2)=193EU/g=0.193EU/mg，转换为EU/ml表示时，L=0.193EU/mg50mg/ml=9.65EU/ml。 大输液品种的限值一般定为0.5EU/ml，灭菌注射用水则定为0.25EU/ml。 2、样品最大有效稀释倍数或最小有效浓度的计算最大有效稀释倍数(MVD)是指在所选择的鲎试剂灵敏度条件下，对产品进行最大倍数的稀释，仍能够进行内毒素限值的检测，此时所允许稀释的最大倍数。 MVD的计算公式为:当被规定的内毒素的限值以体积表示时，MVD=内毒素限值L(EU/ml)/鲎试剂灵敏度(λ);当内毒素的限值以重量或药品的生物活性(EU/mg或EU/u)表示时，MVD=内毒素限值L(EU/mg或EU/u)×供试品溶液的浓度C/鲎试剂灵敏度(λ)。 在凝胶法中，λ=鲎试剂的标示灵敏度(EU/ml)，在浊度法或显色法中，λ=所使用标准曲线上最低点的内毒素浓度(EU/ml)。 计算MVC的一般公式为:MVC=鲎试剂灵敏度(λ)/内毒素限值(L)。 对所选定的鲎试剂灵敏度来讲，MVC是一个绝对值;而MVD对特定的产品浓度是特异的，浓度变化时，MVD也会随之发生变化。 3、方法学验证试验的预试验确定了样品的内毒素限值，考察了样品的溶解性，并且选定了一定灵敏度的鲎试剂，此时便可以考虑进行预试验。 尽管法规中并不要求进行预试验，但在细菌内毒素检查法的建立过程中，一般需要进行预试验。 预试验的主要目的是确定不出现干扰的第一个样品稀释度，也就是不干扰浓度(non-interferingconcentration，NIC)，为后续的验证试验选择适当的样品稀释度(或浓度)。 可以采用直接把内毒素添加到样品溶液中，添加内毒素的体积宜小，以免导致样品溶液被稀释，一般添加体积等于或小于样品体积的10%为宜;也可以采用下述方法添加内毒素，就是将两倍于终浓度的内毒素溶液与两倍于终浓度的样品溶液等体积混合，内毒素和样品溶液间相互稀释，得到两者所需终浓度的混合液。 添加内毒素的浓度，凝胶法为2λ;终点显色法为4λ(这里的λ表示标准曲线上的最低点，也就是方法的检测限)。 此外，当样品稀释液中，内毒素的限值小于或等于1.0EU/ml时，添加内毒素的浓度可定为0.1-0.5EU/ml之间，当样品稀释液中，内毒素的限值大于或等于1.0EU/ml时，添加内毒素的浓度可定为1.0-5.0EU/ml之间。

细菌内毒素检验方法相关知识-20230415.docx

细菌内毒素检验方法相关知识首先谈谈细菌内毒素的概念。 细菌内毒素，英文称作，是G-菌细胞壁个层上的特有结构，内毒素为外源性致热原，它可激活中性粒细胞等，使之释放出一种内源性热原质，作用于体温调节中枢引起发热。 细菌内毒素的主一般细菌毒素可分为两类，一类为外毒素(Exotoxin);它是种毒性蛋白质，是细菌在生长过程中分泌到菌体外的毒性物质。 产生外毒素的细菌主要是革兰氏阳性菌。 如白喉杆菌、破伤风杆菌、肉毒杆菌、金黄色葡萄球菌以及少数革兰氏阴性菌。 另一类为内毒素(Endotoxin)。 是革兰氏阴性菌的细胞壁的产物。 细菌内毒素被认为是热原的本质，此事在学术上仍有争议，热原不仅是细菌内毒素。 但在药检的范畴，细菌内毒素是主要的热原物质，可以说无内毒素就无热原，控制内毒素就是控制热原。 热原反应:含有热原的注射剂注入人体可引起发热反应，使人体产生发冷、寒战、体温升高、出汗、恶心、呕吐等症状，有时体温可升至40，严重者甚至昏迷、虚脱，如不及时抢救，可危及生命。 常用的吸附剂中，活性炭对热原的吸附作用最强，一般用量为总容量的0.1%-0.5%，将溶液加热到70左右保温一定时间效果更好。 使用的活性炭应符合药典规定要求。 蒸馏法此法是利用热原具有不挥发性而达到去除目的。 热破坏法此法是利用热高温能破坏热原质达到去除目的。 因此，凡适用于高温处理的如热原检查试验中接触药液的容器，可用180干烤3小时，或250干烤30min以上。 强酸强碱处理法此法利用强酸强碱能破坏热原而达到去除的目的。 热原及内毒素检验方法家兔热原法由于家兔对热原的反应与人基本相似，家兔法为各国药典规定的检查热原的法定方法。 《中国药典》2005年版规定的热原检查法系将一定剂量的供试品，静脉注入家兔体内，在规定时间内，观察家兔体温升高的情况，以判定供试品中所含热原的限度是否符合规定。 检查结果的准确性和一致性取决于试验动物的状况、试验室条件和操作的规范性。 家兔法检测内毒素的灵敏度为0.001μg/ml，试验结果接近人体真实情况，但操作繁琐费时，不能用于注射剂生产过程中的质量监控，且不适用于放射性药物、肿瘤抑制剂等细胞毒性药物剂。 细菌内毒素检查法(鲎试剂法)细菌内毒素检查法系利用鲎试剂来检测或量化由革兰阴性菌产生的细菌内毒素，以判断供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法.细菌内毒素的量用内毒素单位(EU)表示。 细菌内毒素这个概念在1890年的时候就已被提了出来，它是在研究发热物质过程所引起的，年Boivin最先由小鼠伤寒杆菌提取出来，进行化学免疫学方面的研究，到1940年时候，Morgan使用志贺氏痢疾菌阐明了细菌内毒素是由多糖脂质及蛋白质三部分所组成的复合体，到了1950学等的进步发展，细菌内毒素的研究工作，尤其是其化学结构组成及各种生物活性间的关系也更加明确起来。 1956年美国人Bang发现美洲鲎血液遇革兰氏阴性菌时会产生凝胶。 由于鲎试剂法简单﹑快速﹑灵敏﹑准确，已广泛用于临床、制药工业药品检验等方面。 细菌内毒素检查包括凝胶法和光度测定法两种方法，前者利用鲎试剂与细菌内毒素产生凝集反应的原理来检测或半定量内毒素，后者包括浊度法和显色基质法，系分别利用鲎试剂与内毒素反应过程中的浊度变化及产生的凝固酶使特定底物释放出呈色团的多少来测定内毒素。 鲎试剂法检查内毒素的灵敏度为0.0001μg/ml，比家兔法灵敏10倍，操作简单易行，试验费用低，结果迅速可靠，适用于注射剂生产过程中的热原控制和家兔法不能检测的某些细胞毒性药物制剂，但其在美国，鲎试验被称作为\"细菌内毒素试验(BacterialEndotoxin收载于1980年20版美国药典。 随后英、德、意、日以及中国相继在药典中收载了这一检查法。 此后鲎试验逐渐替代家兔热原试验，但由于部分药品由于自身特殊性无法通过稀释法消除干扰，因此鲎试验还无法完全取代家兔热原试验2005年版中国药典规定168个品种进行细菌内毒素检查法，并收录了2种细菌内毒素检查法:包括凝胶法和光度测定法两种方法。 前者利用鲎试剂与细菌内毒素产生凝集反应的原理来定性检测或半定量内毒素，后者包括浊度法和显色基质(比色)法，系分别利用鲎试剂与内毒素反应过程中的浊度变化及产生的凝固酶使特定底物释放出呈色团的多少来定量测定内毒素。 比色法又可分为终点显(比)色法和动态比色法。 该方法灵敏度、精密度高。 国内如厦门鲎试剂厂早在05年即有显色基质(终显色)鲎试剂盒上市。

内毒素工作标准品要怎么使用才对?-科德角国际生物医学科技(北京)...

内毒素工作标准品由精制大肠杆菌制备而成，用于细菌内毒素检查中的鲎试剂灵敏度复核、干扰试验和各种阳性对照，也可用于内毒素定量检查。 本产品是中国食品药品检定研究院制备，以细菌内毒素国家标准品为基准标定其效价，其标准和各国药典一致。 用于试验中堂试剂灵敏度复核、干扰试验及设置的各种阳性对照。 您好，欢迎访问科德角国际生物医学科技(北京)有限公司!咨询热线:18701356057科德角国际生物医学科技(北京)有限公司热门搜索:鲎试剂，内毒素检测仪，内毒素检测试剂盒，基因重组鲎试剂，浊度法鲎试剂，显色法鲎试剂，凝胶法鲎试剂，葡聚糖缓冲液，无热原水，鲎试剂耗材 1、溶解:内毒素工作标准品使用时加入细菌内毒素检查用水1ml，复溶后置旋涡混合仪上混匀15min; 2、稀释:用细菌内毒素检查用水将内毒素制备成所需浓度的细菌内毒素标准溶液(如2.0入、入、0.5入、0.25入等)，每稀释一步均应旋涡混合仪上混合30s。 3、1Eulml的内毒素工作标准品内毒素溶液可按倍比稀释内毒素，制备系列浓度的内毒素溶液，稀释后的内毒素必须在4小时内使用。

细菌内毒素工作标准品检验操作规程

细菌内毒素工作标准品检验操作规程部门质量控制部题目细菌内毒素工作标准品检验操作规程起草审阅批准共2页编号HY02ZK203执行日期页码第1页细菌内毒素工作标准品检验操作规程一、范围:本标准规定了细菌内毒素工作标准品的测定方法和操作要求适用于

最终版内毒素实验凝胶法.ppt

最终版内毒素实验凝胶法.ppt，鲎试剂与内毒素反应机理内毒素C因子活化的C因子凝胶B因子凝固酶原凝固酶活化的B因子凝固蛋白原鲎凝血系统-酶联反应;.;二、细菌内毒素凝胶法实验程序1、试验准备:试剂、仪器及用具2、选择鲎试剂灵敏度，计算样品稀释度3、鲎试剂灵敏度复核4、供试品干扰试验(新药或新方法)5、供试品内毒素限量检查;.;凝胶法中用到的仪器1.超净工作台;.;*凝胶法中用到的仪器2.恒温培养箱孵育样品浸提液以及培养试验结果。;.;*凝胶法中用到的仪器3.干烤箱

细菌内毒素的标准品的纯阳不凝怎么回事? 内毒素的标准品是中检所...

细菌内毒素的标准品的纯阳不凝怎么回事?内毒素的标准品是中检所的，180EU和90EU的、纯阳不凝，用注射水做的话，样品阳性就凝，要是用待检的药品做细菌内毒素的检测，样品阳性就不凝、、、不知道是不是标准品的菌种失活了呢??温度保持在37度那、、细菌内毒素的标准品纯阳不凝可能涉及以下几个方面的原因:复溶操作不当:内毒素标准工作品加BET水复溶是很关键的一步，一定要按药典操作，即加BET水后在振荡器上振荡15min，否则内毒素不均会出现这种情况。 综上所述，细菌内毒素的标准品纯阳不凝可能是由于复...。 细菌内毒素的标准品的纯阳不凝怎么回事?内毒素的标准品是中检所的，180EU和90EU的、0 1个回答 私信TA细菌内毒素的标准品纯阳不凝可能涉及以下几个方面的原因:复溶操作不当:内毒素标准工作品加BET水复溶是很关键的一步，一定要按药典操作，即加BET水后在振荡器上振荡15min，否则内毒素不均会出现这种情况。 鲎试剂灵敏度问题:更换不同批号或不同厂家的鲎试剂后，一定要做鲎试剂灵敏度复核试验，否则不知该批鲎试剂灵敏度是否符合要求。 上述两种情况都会出现你说的结果。 综上所述，细菌内毒素的标准品纯阳不凝可能是由于复溶操作不当或鲎试剂灵敏度问题导致的。 在进行细菌内毒素检测时，应严格按照药典操作规程进行，并对鲎试剂进行灵敏度复核，以确保检测结果的准确性。 00分享

中国药典和美国药典的内毒素检测要求.doc

中国药典和美国药典的内毒素检测要求.doc，鲎试剂-LAL，中国药典和美国药典的内毒素检测要求???鲎试验法是国际上至今为止检测内毒素最好的方法，它简单﹑快速﹑灵敏﹑准确，因而被欧美药典及我国药典定为法定内毒素检查法，并已被世界各国所采用。???目前国际上销售的鲎试剂有两种，一种称美洲鲎试剂(LimulusAmebocyteLysate)，缩写为LAL，由美国生产;另一种称东方鲎鲎试剂(TachypleusAmebocyteLysate)，缩写为TAL。实验证明:美洲鲎试剂-LAL比东方鲎试剂LAL更纯洁，检测效果更好。

细菌内毒素检查时,供试品溶液为什么要稀释

细菌内毒素检查时，供试品溶液为什么要稀释供试品溶液在细菌内毒素检查时稀释的原因是为了排除干扰并确保检测准确性。 在进行细菌内毒素检查时，供试品溶液可能含有干扰成分，这些成分可能会影响检测结果的准确性。 此外，稀释还可以帮助将供试品溶液的pH值调整到适合检测的范围内，通常要求供试品溶液的pH值在6.0～8.0之间。 如果供试品溶液的原始pH值过高或过低，就需要通过稀释或...。 1个回答 私信TA供试品溶液在细菌内毒素检查时稀释的原因是为了排除干扰并确保检测准确性。 稀释供试品溶液是一种常见的方法，用于降低这些干扰成分的浓度，从而减少它们对检测过程的影响。 如果供试品溶液的原始pH值过高或过低，就需要通过稀释或其他方法进行调节。 00分享

QC_7130B细菌内毒素工作标准品标定操作规程.doc

QC_7130B细菌内毒素工作标准品标定操作规程.doc5页VIP QC_7130B细菌内毒素工作标准品标定操作规程.doc 想预览更多内容，点击免费在线预览全文 QC_7130B细菌内毒素工作标准品标定操作规程 题目:细菌内毒素工作标准品标定操作规程SOPforstandardizationofaCSEagainsttheRSE登记号:QC-7130B页数:PAGE5/NUMPAGES5审核:职务:日期:制定:职务:日期:生效日期:批准:职务:日期:颁发部门:QA失效日期:原登记号:QC-7130A分发部门:QA、QCvv标题:目的范围职责参考资料定义细菌内毒素工作标准品效价的标定标题:标题:细菌内毒素工作标准品的有效期细菌内毒素工作标准品的保存需标定的情况相关记录正文规范细菌内毒素工作标准品效价的标定程序，确保细菌内毒素检查结果的可靠性。 适用于质监处药理室对细菌内毒素工作标准品效价的标定。 质监处药理室分析人员负责本规程的实施和完成相关记录。 USP版附录85;CP版附录ⅪE。 细菌内毒素检查法:本法系利用从鲎的变形细胞中提取的试剂来检测或量化由革兰阴性菌产生的细菌内毒素，以判断供试品中细菌内毒素的含量是否符合规定的一种方法。 细菌内毒素的量用内毒素单位(EU)表示。 鲎试剂:是鲎变形细胞的溶出物经提取而成。 鲎试剂灵敏度:在本检查法规定的条件下能检测出内毒素标准溶液或供试品溶液中的最低内毒素浓度，用EU/ml表示。 细菌内毒素参考标准品(RSE):RSE是USP细菌内毒素参考标准品，每瓶有10，000个USP内毒素单位。 细菌内毒素工作标准品(CSE):是除RSE之外的内毒素标准品。 反应终点浓度:是指系列递减的内毒素浓度中最后一个呈现阳性结果的浓度。 一、试剂、材料与仪器设备试剂:鲎试剂批号、灵敏度、规格、生产商。 细菌内毒素工作标准品(CSE)批号、效价、生产商。 细菌内毒素参考标准品(RSE)批号、效价、生产商。 材料及仪器设备:电热恒温水箱型号、设备编号。 电热鼓风干燥箱型号、设备编号。 正文漩涡混合器型号。 无热原玻璃吸管规格:1ml、2ml、5ml、10ml。 二、试验准备试验所用的容器、用具都必须经过处理，250?C以上干烤至少1小时，以去除外源性内毒素。 三、内毒素溶液配制USP细菌内毒素参考标准品(RSE)系列溶液配制取RSE1瓶，加入5ml细菌内毒素检查用水溶解并用漩涡混合器间歇混匀30分钟，然后用细菌内毒素检查用水进一步稀释至2.0?、?、0.5?、0.25?四个浓度的内毒素标准溶液，每一步稀释应混匀至少30秒钟。 细菌内毒素工作标准品(CSE)系列溶液配制取待测CSE1支，以eu为单位(避免和参考标准品的效价EU混肴，而采用eu)，按使用说明书要求用细菌内毒素检查用水溶解并用漩涡混合器间歇混匀30分钟，然后用细菌内毒素检查用水进一步稀释成至2.0?、?、0.5?、0.25?四个浓度的内毒素溶液，每一步稀释应混匀至少30秒钟。 四、试验过程取同一批号的鲎试剂原安瓿34支，分别用0.1ml细菌内毒素检查用水复溶。 其中16支加入0.1mlUSP细菌内毒素系列标准溶液，每浓度溶液平行做4支;16支加入0.1ml细菌内毒素工作标准品系列溶液，每浓度溶液平行做4支。 另外2支加入0.1ml细菌内毒素检查用水作为阴性对照。 将安瓿中的溶液轻轻混匀后，用封口膜封闭管口，垂直放入37?1℃电热恒温水箱中，保温60?2分钟。 反应结果记录在细菌内毒素工作标准品标定试验记录中。 五、试验结果观察和有效性结果观察将安瓿从电热恒温水箱中轻轻取出，缓缓倒转180°时，管内凝胶不变正文形，不从管壁滑脱者为阳性，记录为(+);凝胶不能保持完整并从管壁滑脱者为阴性，记录为(–)。 有效性对于参考标准品内毒素系列和被标定的工作标准品内毒素系列，如果最大浓度2.0?管均为阳性，最低浓度0.25?管均为阴性，阴性对照管均为阴性，试验方为有效。 六、细菌内毒素工作标准品标定结果的计算计算公式为:式中ERSE为USP细菌内毒素参考标准品反应终点浓度(EU/ml)，ECSE为细菌内毒素工作标准品反应终点浓度(eu/ml)，PCSE为细菌内毒素工作标准品的标定效价，其单位为EU/瓶。 七、结论细菌内毒素工作标准品必须经标定后，方可用于鲎试剂灵敏度的复核及细菌内??素检查，并以计算结果PCSE作为该批细菌内毒素工作标准品的效价。 细菌内毒素工作标准品有效期按厂家规定执行;若厂家未规定有效期，至标定后两年，到期后需重新标定方可以新标定效价继续使用。 细菌内毒素工作标准品应在4～8℃条件下保存。 当细菌内毒素参考标准品(RSE)批号改变时。 当细菌内毒素工作标准品批号改变时。 细菌内毒素工作标准品标定记录(表格编号:QCFP04-06)。